| 在流式胞内染色中常用的活化细胞方法就是用一定浓度的PMA和Ionomycin刺激细胞4-6小时，同时加入蛋白转运抑制剂（通常是monensin或brefeldin A）来阻止高尔基体将新分泌蛋白运输到细胞外，从而达到通过流式来检测胞内细胞因子的目的。经常会有老师有这样的疑问：加入PMA和Ionomycin，不会间接影响我的实验样本的胞内因子分泌情况嘛？那么天，我们就来简单的聊一聊PMA和Ionomycin刺激细胞活化的机制。 背景知识 在细胞内，Protein kinase C (PKC)的激活，可以引起下游众多蛋白激酶的磷酸化，形成联反应，导致多种蛋白的表达，进而引起细胞的活化。PKC可以在DAG(二脂酰甘油)和Calcium（Ca2+）的共同作用下而激活。PMA是一种DAG的模拟物，而Ionomycin是Ca2+的转运剂，可将细胞器内的Ca2+转运到胞浆，所以PMA和Ionomycin的共同作用可以激活PKC，从而引起一系列的下游反应。PMA的中文名称是豆蔻酰佛波醇乙酯（也称TPA），英文全称是：Phorbol-12-myristate-13-acetate(PMA)，或12-O-Tetradecanoylphorbol 13-acetate(TPA)，是一种常用的佛波酯(phorbol ester)，在细胞遗传学试验中，TPA被视为B细胞淋巴瘤细胞的有丝分裂原(Mitogen)，可刺激B细胞的分裂以便于对特定细胞的染色体进行观察，从而帮助诊断诸如慢性淋巴细胞白血病的血液癌症。 了解了PMA和Ionomycin刺激细胞活化的机制，再来探讨流式胞内染色中如何合理的使用刺激剂对细胞进行刺激，已达到检测目的。对于小鼠的淋巴细胞或人的PBMC样本中的一些胞内因子（如IFN-γ、IL-2、TNF-α等），直接用PMA和Ionomycin刺激培养一段时间后，就可以用流式胞内染色的方法进行检测。但是对于有一些细胞因子，比如mouse的IL-4等，正常情况下直接用PMA和Ionomycin刺激培养4-6小时后是很难检测到IL-4的信号，对于这些胞内因子的检测是需要实验人员设计合理的刺激方案进行刺激。关于检测不同胞内因子的刺激方案，BioLegend公司也提供了一些参考的信息，如下图所示，更多内容请进入以 
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司 |
