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技术文章详细
Walker256细胞 |
阅读次数:7437 发布时间:2018/10/23 9:00:32 |
Walker256复苏与传代 - 在液氮中取出冻存管
- 置于39℃水浴中,迅速溶化
- 用2ml注射器吸取细胞悬液,注射到Wistar大鼠腹腔中
注意事项: 1.准备1只雌性大鼠,100-110g(120g以上的大鼠很难有腹水) 2.待第7天左右开始密切观察大鼠的腹水及存活情况,如果活力佳,有明显移动性腹水,可以放腹水2次左右;一旦发现大鼠活动受限,要立即处死取腹水; 3.一般每次可以收取20-60ml(甚至更多)。 - 腹水采集与传代分成两类:活着抽取腹水和处死抽取腹水
大鼠对不同杂交瘤细胞的敏感性不同,有的注射后两周即死亡,walker256腹水鼠一般20天左右死亡,有的会出现血性腹水,以下供参考: 制备大鼠腹水流程: 1.活着抽取腹水 1) 将walker256腹水鼠用灌胃的姿势固定好(左手固定) 2) 酒精消毒整个腹水鼠腹部 3) 右手拿20ml注射器针管加1ml注射器针头插入walker256腹水鼠腹腔内(在腹部中线旁刺入空隙,勿扎住内脏) 4) 抽取腹水 5) 用灭菌生理盐水稀释腹水,细胞计数器计数,使细胞总数在1×107个/ml 6) 如果是传代室温放置就行,要是接瘤必须准备碎冰盒,把要接瘤的腹水放置在碎冰盒里面 2.处死抽取腹水 1)将walker256腹水鼠脱臼处死,75%酒精棉球将腹部消毒 2)用已灭菌的眼科剪,剪开腹部皮层(只剪皮层,不剪肌肉层) 3)暴露腹部肌肉,将walker256腹水鼠用灌胃的姿势固定好(左手固定) 4) 右手拿20ml注射器针管加1ml注射器针头插入walker256腹水鼠腹腔内(在腹部中线旁刺入空隙,勿扎住内脏) 5) 抽取腹水 6)用灭菌生理盐水稀释腹水,细胞计数器计数使细胞总数在1×107个/ml 7)如果是传代室温放置就行,要是接瘤必须准备碎冰盒,把要接瘤的腹水放置在碎冰盒里面 注意事项: 每次取腹水的时候,可以观察一下: 1.腹水收集少的大鼠,肠壁、内脏和腹壁上是否有实体瘤,如果有说明注射方式和细胞数目还是有问题; 2. 收集的是血性腹水(红色)还是非血性腹水(黄色),一般血性腹水的产量低。这和杂交瘤的种类和注射有关。 3.可以仔细观察大鼠注射杂交瘤后的存活期和腹水产量,实体瘤产生、血性腹水之间的关系。原创作者:上海雅吉生物科技有限公司 |
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