| 培养操作及注意事项说明 一．产品简介 1、细胞名称：4T1；小鼠乳腺癌细胞 2、生长特性： □ 贴壁 □ 悬浮 □半悬浮半贴壁 3、细胞生长条件： | 培养条件 | 1640+10%FBS+1%双抗 | | 温度 | 37℃ | | 空气条件 | 5% CO2，,95% AIR | | 传代方法 | 1:2传代，2~3天换液 | | 冻存条件 | 90%FBS+10%DMSO | 4、背景资料：4T1是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当注射到BALB/c小鼠中时，4T1自发产生高转移肿瘤，可转移到肺，肝，淋巴结和大脑，同时在注射部位形成始发灶。诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近。这种肿瘤是人VI期乳腺癌的动物模型。4T1-诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近，可以用作手术后及未手术模型。跟其他肿瘤模型相比，由于4T1的抗6-硫鸟嘌噙特性，微小的转移细胞团(少到仅仅1个)也可以在许多远端器官中检测到。没必要数淋巴结或称重器官。 二．使用方法 1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作： 取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。 2、细胞传代： 1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。 3、细胞冻存： 1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中； 4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min； 3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养； 4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。 原创作者：上海雅吉生物科技有限公司 |
