实验方法原理创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法,也是*早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”,在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口,以及比较图像以确定细胞迁移速率。 实验材料细胞样品 试剂、试剂盒无血清培养基PBS 实验步骤 一.准备: 所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内) 二.流程: 1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。 3.第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。 4.用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。 5.放入37度5%CO2培养箱,培养。按0,6,12,24小时取样,拍照。 下面是照片,细胞NIH3T3 注意事项 1.划痕法测量适用的细胞范围较小,一般只适用于上皮细胞,纤维样细胞。 2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多 原创作者:上海雅吉生物科技有限公司 |