大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 使用目的: 本试剂盒用于测定植物样本中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)的含量。 实验原理 本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)水平。用纯化的大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin),和HRP标记的大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)抗原,使它们竞争结合,,经过彻洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)的含量。 试剂盒组成 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 8 | 标准品S1(4800μg/ml) | 0.5ml×1瓶 | 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 标准品S2 ( 2400μg/ml) | 0.5ml×1瓶 | 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 标准品S3(1200μg/ml) | 0.5ml×1瓶 | 4 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 标准品S4(600μg/ml) | 0.5ml×1瓶 | 5 | 显色剂B液 | 6ml×1瓶 | 标准品S5(300μg/ml) | 0.5ml×1瓶 | 6 | 终止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 说明书 | 1份 | 7 | 样品稀释液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2张 | 标本要求 1.标本处理:(1)水样 采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查 (2)组织 样品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 2. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。 6. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 8. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 计算 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 检测范围: 100μg/ml -4800 μg/ml 规格: 96人份/盒 保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6个月 原创作者:上海雅吉生物科技有限公司 |