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  • 季节性甲型H3流感病毒实时荧光PCR检测试剂盒
  • 型号:
  • 所在地:中国大陆
  • 发布时间:2020/5/14 10:36:15
  • 采购热度:44
  • 简介内容:甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR检测试剂盒,本试剂盒针对SIAV-H3病毒基因组高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含SIAV-H3病毒基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析
详细介绍

 甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR检测试剂盒

【产品名称】

通用名称:季节性甲型H3流感病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)

英文名称Seasonal influenza A virus H3 subtype Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】25T/& 50T/

【预期用途】

本试剂盒利用实时荧光PCR原理,定性检测季节性甲型H3流感病毒(SIAV-H3),对SIAV-H3引起的流感及其并发症的诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针对SIAV-H3病毒基因组高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含SIAV-H3病毒基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR检测试剂盒

序号

组成

25T/

50T/

1

SIAV-H3 RT-PCR反应液

437.5 μL×1

875 μL×1

2

SIAV-H3混合

62.5 μL×1

125 μL×1

3

SIAV-H3阳性对照

40 μL×1

 40 μL×1

4

SIAV-H3阴性对照

40 μL×1

 40 μL×1

5

说明书

1

1

注:阴性对照为人基因组DNA,阳性对照为失去活性的季节性甲型H3cDNA

【储存条件及有效期】避光-20以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

采用鼻拭子、咽拭子等方法获得样本。具体操作方法如下:

1)鼻拭子: 操作者将沾湿的无菌拭子平行于上腭的角度轻轻地左右转动从一侧鼻孔插入至鼻道内鼻腭处,一般当拭子插入有阻力时再将拭子停留23s后缓慢转动退出

2)咽拭子:操作者一手持压舌板压住病人舌后根,另一手拿住无菌拭子根部,然后将沾湿的无菌拭子左右两面及拭子头部快速且较用力地分别刮取扁桃腺两侧及咽后壁的分泌物。

3)将鼻拭子和咽拭子一起放人盛有1.0ml生理盐水的离心管中备用。

应避免标本间交叉污染。

标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于28冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80以下,避免反复冻融。

【检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR检测试剂盒

1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T+阳性对照数(1T+误差预留量(1T+样本数

单反液配制表(每份)

RT-PCR反应液

17.5μL

混合酶液

 2.5 μL

3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备(样本处理区)

QIAGENRoche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

  在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4. PCRPCR扩增区)

1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

 甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR检测试剂盒

 

 

反应体积

25 μL

通道选择

FAM通道采集  SIAV-H3荧光信号

 PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

反转录

5010分钟(min

1

预变性

953分钟(min

1

PCR扩增

955秒(s

40

5540秒(s

(此阶段结束时采集荧光信号)

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None

【参考值(参考范围)】

1.试剂盒有效性判定:

1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct≤35

2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

2.标本结果判定:

1阳性:标本检测结果Ct≤35或有明显指数增长期。

2)可疑:标本检测结果Ct值在3538范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在3538范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。

3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

【检验结果的解释】

通道及检测结果

标本检测结果解释

FAM

阴性(-)

标本中未检出SIAV-H3 RNA

阳性(+)

标本中检测出SIAV-H3 RNA

【检验方法的局限性】

1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的检出限时可能会发生假阴性的结果。

2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。

3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。

【产品性能指标】 产品的检出限为103 Copies/mL,产品CV3%

【注意事项】

1. 使用本试剂盒的实验室,应严格按照国家有关部分颁布的有关基因扩增检验实验室管理规范进行管理

2. 为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理

3. 各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染检测结束后,应立即对工作台清洁

4. 吸取反应液时,应尽量避免产生气泡 PCR 仪前,应注意检查各反应管是否盖紧,以免液体蒸发造成结果不准确

5. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心;

6. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在首次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放

7. 为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记

8. 检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有 10%次氯酸的废物缸内,检测结束的PCR 反应管,切忌开盖,并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃工作台及各种实验用品应定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒

9. 仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用并在有效期内使用。

甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR检测试剂盒

 

 

更新时间:2020/5/22 15:04:17

标签:甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR检测试剂盒   

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