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玉米赤霉烯酮检测试剂盒 使用说明书

阅读人数:85 发布时间:2020/6/29 10:02:08

 
1 原理及用途
本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法检测谷物、饲料、食用
油、啤酒、酱油等样本中的玉米赤霉烯酮(Zearale,ZEN
(又称 F-2 毒素),试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根
酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时,加入
标准品或样本溶液,样本中的玉米赤霉烯酮和酶标板上预包被
偶联抗原竞争抗玉米赤霉烯酮抗体,加入酶标记物后,用 TMB
底物显色,样本吸光度值与其所含玉米赤霉烯酮含量成负相
关,与标准曲线比较即可得出样本中玉米赤霉烯酮的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度:0.3ppb(ng/ml)
2.2 反应模式:25℃,30min~15min
2.3 检测下限:
谷物及配合饲料…………………6ppb
2.4 交叉反应率:
玉米赤霉烯酮……………………100%
玉米赤霉酮………………………13%
玉米赤霉醇………………………<1%
2.5 样本回收率:
谷物及配合饲料…………………90%±15%
3 试剂盒组成
酶标板……………………………96 孔
标准液(黑盖):各 1ml
0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb
酶标记物(红盖)…………………5.5ml
抗体工作液(蓝盖)………………5.5ml
底物液 A(白盖)……………………6ml
底物液 B(黑盖)……………………6ml
终止液(黄盖)………………………6ml
20X 浓缩洗涤液(白盖)……………40ml
说明书………………………………1 份
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器:酶标仪、打印机、均质器 、振荡器、离心机、刻
度移液管、天平(感量 0.01g)
4.2 微量移液器:单道 20µl-200µl,100µl-1000µl、多道 300µl
4.3 试剂:甲醇、去离子水
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知:
实验器具必须洁净并使用一次性吸头,以避免污染干扰实
验结果。
5.2 配液:
配液 1:样本提取液
90%甲醇,即 V 甲醇:V 去离子水=V9:V1。
配液 2:1×工作洗涤液
将浓缩洗涤液 20 倍稀释(1 份洗涤液加 19 份去离子水)。
5.3 样本前处理步骤:
5.3.1 谷物(大米、玉米、小米等低脂含量)及配合饲料
处理方法
1)称取 2g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加 8ml 样本提取液,
振荡 5 分钟,室温 4000 转/分离心 10 分钟;
2)取 0.5ml 上清,加入 2ml 去离子水,混匀;
3)取 50μl 进行分析。
稀释倍数:20
检测下限:6ppb
5.3.2 玉米皮、麦麸等吸水性强的样本处理方法
1)称取 2g 粉碎样品于 50ml 离心管中,加 16ml 样本提取液,
振荡 5 分钟,室温 4000 转/分离心 10 分钟;
2)取 0.5ml 上清,加入 2ml 去离子水,混匀;
3)取 50μl 进行分析。
样本稀释倍数:40
检测下限:12ppb
(对于毒素含量极高的样本,可在5.3.2 的 2 步骤中先取 0.1ml
上清加入 0.9ml 样本提取液混匀,再加去离子水 4ml。最终样
本稀释倍数为 400,检测下限为 120ppb。)
注:由于毒素在样本中的分布呈非均匀状态,取样时需多点取
样充分混匀后再取 2g 进行试验。
6 酶联免疫试验步骤
将所需试剂从 4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡 30min
以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,
每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框
架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于 2-8℃。
6.1
号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本
和标准品做 2 孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应:加标准品或样本 50µl/孔到各自的微孔中,然
后加酶标记物 50µl/孔,再加入 50µl/孔的抗体工作液,用盖
板膜封板,轻轻振荡 5 秒混匀,25℃反应 30 分钟。
6.3
涤:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗
涤液加满充分洗涤 5 次,每次间隔 30 秒,用吸水纸拍干(拍
干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
6.4
色:每孔加入底物液 A 50µl,再加底物液 B 50µl,
轻轻振荡 5 秒混匀,25℃避光显色 15 分钟(若蓝色过浅,可
适当延长反应时间)。
6.5
止:每孔加入终止液 50µl,轻轻振荡混匀,终止反
应。
6.6 测吸光值:用酶标仪于 450nm 处测定每孔吸光度值(建议
用双波长 450/630nm)。测定应在终止反应后 10 分钟内完成。
7 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸
光度值的平均值(双孔)除以个标准液(0ppb)的吸光度
值,再乘以 100%,即
百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb 标准溶液的平均吸光度值产品缩写:ZEN
货号:E030202
2
7.2 标准曲线的绘制与计算
以标准液百分吸光率为纵坐标,对应的标准液浓度(ppb)
的对数为横坐标,绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分
吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓
度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的
准确、快速分析。(欢迎来电索取)
8 注意事项
8.1 室温低于 25℃或试剂及样本没有回到室温(25℃)会导致
所有标准的 OD 值偏低。
8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲
线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行
下一步操作。
8.3 混合要均匀,洗板要彻底,在 ELISA 分析中的再现性,很
大程度上取决于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育过程中,用盖板膜封住微孔板,避免光线照射。
8.5 不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试
剂盒中的试剂。
8.6 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0 标准的吸光
度值小于 0.5 个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。
8.7 反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。
9 贮藏及保存期
储藏条件:试剂盒于 2-8℃保存,避免冷冻。
保 质 期:该产品有效期为 1 年,生产日期见包装盒。
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